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植物提取物——理化分析之色譜鑒定法

作者: 西安AG8 添加時間:2017-04-10 來源:植物提取物生產廠家

      植物提取物色譜鑒定法    又稱“層析法”,根據其分離原理,有吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜(size exclusion chromatography)等。吸附色譜是利用被分離物質在吸附劑上被吸附能力的不同,用溶劑或氣體洗脫使組分分離,常用的吸附劑有氧化鋁、矽膠、聚酰胺等有吸附活性的物質。分配色譜是利用被分離物質在兩相中進行分配使組分分離,其中一相為液體,塗布或使之鍵合在固體載體上稱為固定相;另一相為液體或氣體稱為流動相,常用的載體有矽膠、矽藻土、矽鎂型吸附劑與纖維素粉等。離子交換色譜是利用被分離物質在離子交換樹脂上的離子交換作用使組分分離,常用的有不同強度的陽、陰離子交換樹脂,流動相一般為水或含有機溶劑的緩衝液。排阻色譜又稱“凝膠色譜”或“凝膠滲透色譜”,是利用被分離物質分子量大小不同在填充劑上滲透程度不同使組分分離;常用的填充劑有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔矽膠或玻璃珠等,可根據載體和供試品的性質選用水或有機溶劑為流動相。分離方法有柱色譜法、紙色譜法(paper chromatography,PC)、薄層色譜法(thin-layer chromatography,TLC)、氣相色譜法、高效液相色譜法等。色譜法反映的是中藥提取物化學組成及含量情況,能定性定量地反映中藥的鑒別特征,具有分離能力·強、分析速度快、定量準確等特點。在進行色譜鑒定時,所用溶劑應與供試品不起化學反應,除另有規定外,應用純度較高的溶劑;色譜時的溫度;除氣相色譜法或另有規定外,係指在室溫條件操作。
 
      (1)柱色譜法  是利用中藥中的化學成分在柱層析上層析發生分離、及其分離後各組分尺+值的不同進行鑒別。柱色譜包括吸附色譜和分配色譜。供試品可溶於固定液,混以少量載體,加在預製好的色譜柱上端。流動相需先加固定液混合使之飽和,以避免洗脫過程中兩相分配的改變。
 
      (2)紙色譜法  紙色譜法是利用中藥中的化學成分在特製層析用濾紙上層析發生分離、及其分離後各組分Rf值的不同進行鑒別。本法是以紙為載體,以紙上所含水分或其他物質為固定相,以流動相進行展開的分配色譜。所用濾紙應質地均勻平整,具有一定機械強度,必須不含影響色譜效果的雜質,也不應與所用顯色劑起作用,以致影響分離和鑒別效果,必要時可進行處理後再用。 
 
      (3)薄層色譜法  是將適當粒度的吸附劑均勻塗鋪在玻璃板上(或其他支持物上,如鋁製薄板)成一薄層,然後用毛細管或適當的點樣器將樣品液滴加在薄層的起始線上,待樣點上的溶劑揮散後,置於密閉的色譜缸中,用一定的溶劑展開,當溶劑前沿到達距離另一端2-3cm處,取出,幹燥,顯色。樣品中的混合物被分離,各成1個色點,測量起始線至各色點中心的距離,計算各色點比移植。薄層色譜的特點是展開時間短,分離效果好,靈敏度比紙色譜高,而且顯色方便,可以直接噴灑腐蝕性的顯色劑,並可加熱進行鑒定。
 
      (4)高效液相色譜法  高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)的原理與一般液相色譜十分相似,流動相均為液體,包括有液—固色譜、凝膠色譜、離子交換色譜和液—液色譜。高效液相色譜法的流動相是具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩衝液等,用泵將流動相壓入裝有填充劑的色譜柱,注入供試品(被流動相帶入柱內),在填充劑上分離後,各成分先後進入檢測器,用記錄儀記錄色譜圖。河南中冠健業生物科技有限公司所用的儀器為液相色譜儀,常用的色譜柱填充劑有:矽膠(用於正相色譜)、化學鍵合固定相(根據鍵合的基團不同用於反向或正相色譜;如十八烷基矽烷鍵合矽膠常用於反向或離子對色譜)、離子交換填充劑(用於離子交換色譜)、凝膠、玻璃微孔球(用於排阻色譜)等。樣品注入量一般為數微升,柱溫多為室溫,紫外檢測器。
 
      本法與普通色譜法相比具有高速化或高效化的特點;與氣相色譜法相比,因流動相為液體,固體樣品隻要求製成溶液,不需要氣化,因而具有不受樣品揮發性限製的優點,適用範圍廣。所以,本法可適用於中藥中各類成分的鑒定。
 
——西安AG8植物提取物生產廠家
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