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金銀花提取物中綠原酸含量的檢測辦法

作者: 植物提取物 添加時間:2018-06-05 來源:金銀花提取物

      意圖樹立金銀花提取物中綠原酸含量的HPLC測定辦法。辦法國產C18柱(4.6mm×250mm,7μm);活動相為乙腈:0.4%磷酸(12∶88);檢測波長為327nm;流速1ml·min-1;進樣量10μl;柱溫25℃。成果綠原酸在0.0716~0.6444μg範圍內線性關係傑出,r=0.9996;均勻回收率99.99%,RSD=1.61%(n=6)。定論該辦法簡潔、快速、精確,可用於金銀花提取物的含量測定及質量操控。
 
  金銀花入藥有兩種方式,一是以全草直接投料,煎煮入藥,即以煎煮液(即藥材的提取液)作為半成品(中間體);另一種是先提取有用部位,而後以提取物投料,即以提取物作為中間體(原料)為了有用操控金銀花提取物(中間體)的內涵質量,本試驗參考了有關文獻[2,3]及2005版《我國藥典》[4]辦法,選用高效液相色譜法測定金銀花提取物中綠原酸含量。
 
  1儀器與試藥
 
  Agilent1100series高效液相色譜儀(G1322A排氣閥,G1311A泵,G1316A柱溫箱,G1314A紫外檢測器),chemistation色譜工作站,KromasilC18色譜柱,超聲提取器,綠原酸對照品(我國藥品生物製品判定所,批號110753-200212),金銀花提取物(本試驗室克己),乙腈,磷酸均為剖析純;水為雙蒸水。
 
  2辦法與成果[5]
 
  2.1剖析辦法的樹立——別離及檢測條件的選擇
 
  2.1.1色譜條件色譜柱為國產KromasilC18柱(250mm×4.6mm,7μm);柱溫25℃;活動相為乙腈-0.4%磷酸(12∶88);流速為1ml·min-1;檢測波長327nm。
 
  2.1.2pH值對峰形的影響綠原酸歸於有機酸類物質,在HPLC測定時易發作前沿或拖尾峰,活動相參加酸能夠改進這種現象。本試驗比較了水、乙酸、磷酸對峰形的影響,當選用0.4%磷酸時,可得到較好的色譜峰形。
 
  2.1.3色譜體係適應性試驗在選定條件下,綠原酸和樣品中其他組分可基線別離,綠原酸與其相鄰色譜峰的別離度大於1.5,理論塔板數(N)為5000以上。
 
  a-對照品b-供試品
 
  2.2對照品溶液的製備精細稱取綠原酸對照品適量,置棕色量瓶中,加50%甲醇製成每毫升含35.8μg的溶液,即得。2.3供試品溶液的製備精細稱取本提取物10mg,置100ml容量瓶中,雙蒸水溶解,超聲2min後,再用雙蒸水定容至刻度,搖勻,過0.45μg微孔濾膜,取續濾液即得。
 
  2.4線性範圍的考察及其規範曲線的製作精細汲取對照品溶液2,4,6,10,14,18μl,別離注入液相色譜儀。按上述色譜條件測定峰麵積。以峰麵積積分值(A)對進樣量進行回歸,得回歸曲線方程:Y=2468.4X-16.205,r=0.9996。成果標明,綠原酸在0.0716~0.6444μg範圍內與峰麵積呈傑出的線性關係。
 
  2.5精細度試驗精細汲取對照品溶液10μl,按上述色譜條件重複進樣6次,記載各組綠原酸峰麵積值,成果均勻峰麵積為:840.5,RSD為0.69%(n=6)。
 
  2.6安穩性試驗取同一供試品溶液,別離於0,2,4,6,8h進樣10μl,測得綠原酸的均勻峰麵積值為:680.24,RSD為:0.38%(n=5),標明供試品溶液在8h內安穩。
 
  2.7重複性試驗取同一批號(070204)樣品6份,按含量測定辦法測定,成果綠原酸均勻含量為28.01%,RSD為1.07%(n=6)。
 
  2.8加樣回收率試驗精細稱取已知含量的金銀花提取物6份,別離精細增加綠原酸對照品適量,按供試品溶液的辦法製備,測定,核算回收率。
 
  2.9樣品測定取3批樣品,依照上述辦法製備供試品溶液,進樣10μl,依照已斷定的色譜條件測定,按峰麵積值用外標法核算樣品中綠原酸的含量。
 
  3評論
 
  金銀花提取物以有機酸為有用成分,本試驗以綠原酸含量作為金銀花提取物的質量操控目標,一起測定了3批金銀花提取物中綠原酸的含量,經過核算,其含量均在20%以上。本文所樹立的辦法簡潔、方便,重複性及安穩性均較好,可在實際出產中用於該提取物的質量操控。本文所做的工作為開發金銀花的相關產品供給了質量監控辦法。
——來源:植物提取物廠家
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